Envío dirigido de genes terapéuticos

 

1) Síntesis de acarreadores génicos

  1. Los acarreadores génicos son polímeros que resultan de la conjugación química de la polilisina con un ligando para un receptor de membrana específico. Para la purificación de los acarreadores utilizamos cromatografía líquida de exclusión molecular acoplada a espectrofotometría, así como técnicas de concentración por centrifugación al vacío y por membranas de corte molecular

  2. El sistema de transferencia génica conocido como poliplex se forma por la unión electrostática del acarreador con un plásmido que contiene el gen de interés. El ensamblaje correcto se verifica con microscopía electrónica de transmisión y de fuerza atómica y también con electroforesis (ensayos de retardo y retención)

 2) Estudios de transferencia génica

  1. Contamos con varios plásmidos que contienen genes reporteros como pECFP-Nuc con la proteína cian fluorescente bajo el promotor CMV, phDAT-EGFP-1 y pGreen Lantern 1 que codifican para la proteína verde fluorescente, bajo la dirección del promotor hDAT y el promotor CMV, respectivamente. Además, contamos con plásmidos que contienen genes de interés terapéutico tales como pEF-Bos-hGDNF que contiene el gen para hgdnf bajo el promotor del factor de elongación alfa 2, pAD1-BDNF-flag que contiene el gen BDNF-flag bajo el promotor SV40 y phDAT-BDNF-flag que contiene a BDNF-flag bajo el promotor hDAT

  2. Para estudiar la internalización y expresión de los transgenes utilizamos microscopía confocal en combinación con técnicas de inmunotinción para identificar el linaje celular. Estos estudios los realizamos tanto in vitro, en líneas celulares cancerosas y en cultivo primario de células, como in vivo, en ratas Wistar